X-gal 染色 (投稿者：NMR)

投稿日 : 2014年10月12日 | カテゴリー : 実験プロトコール

Stock solution:
10% NP40(Tergito) (http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/np40s?lang=en&region=US)
1% Sodium deoxycholate
1M MgCl₂: 95.211g/mol: 4.761g/50ml
0.1M EGTA (ethylene glycol tetraacetic acid): 380.35g/mol: 1.902g/50ml
(10 N NaOH 4g/10ml; drop the solution and adjust pH 7-8)
0.5M K₃Fe(CN)₆: 329.26 g/mol: 8.232g/50ml
0.5M K₄Fe(CN)₆: 368.3426 g/mol:9.209g/50ml;
(0.5M K₄Fe(CN)₆ 3H2O:422.41 g/mol:10.56g/50ml)

20mg/ml X-gal(5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside) http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/b4252?lang=en&region=US

Staining procedure:
1) 固定(30分)　4%パラフォルムアルデヒド
2) リンス　PBS溶液　3X5分
3) リンス　NP40 deoxycholate溶液　3X15分以上
NP40 deoxycholate溶液組成
0.02%NP40             10% NP40               0.4ml
0.01%deoxycholate 1% deoxycholate       2ml
PBS                         PBS                    197.6ml
4) 染色　染色液　12-48h　37度　暗条件
染色液組成
5mM K₃Fe(CN)₆        0.5M K₃Fe(CN)₆          1ml
5mM K₄Fe(CN)₆        0.5M K₄Fe(CN)₆          1ml
0.02% NP40             10%NP40                0.2ml
0.01% deoxycholate 1% deoxycholate         1ml
2mM MgCl₂              1M MgCl₂                 0.2ml
5mM EGTA               0.1M EGTA                  5ml
PBS                         PBS                        86.6ml
0.2mg X-gal             X-gal(20mg/ml)           1ml
5) リンス　PBS溶液　3X5分
6) 後固定(15分)　4%パラフォルムアルデヒド(やらなくてもいいかも？)
7) リンス　PBS溶液　3X5分